Resumo |
A doença de Chagas humana, classificada pela OMS como doença negligenciada, acomete cerca de 16 à 18 milhões de pessoas só na America latina, grande parte das quais são representantes da população menos favorecida economicamente. A fase crônica apresenta grande variedade clínica, podendo variar entre formas assintomática (indeterminado) ou sintomática, da qual a cardiopatia representa o quadro clínico mais grave. É aceito na literatura que a bagagem genética do hospedeiro, especialmente no que diz respeito ao perfil de resposta imune bem como condições fibrogênicas, evento importante no acometimento cardíaco, são relevantes no prognóstico clínico. Desta forma, neste trabalho procurou-se estabelecer um protocolo de investigação de polimorfismo genético do gene TGFBR1, envolvido em vias fibrogênicas, bem como investigar novos polimorfismos potencialmente relevantes na fibrose cardíaca, presentes em genes da via de transdução do TGF-, SMAD3, SMAD4 e SMAD7 por métodos computacionais (in silico). As amostras foram coletadas pela raspagem bilateral da mucosa oral de alunos e funcionários da UFV-Florestal com o uso de escova descartável, e foram acondicionadas em Solução nutritiva de Krebs, posteriormente foi realizada a extração do DNA, no laboratório de cultura de tecidos na UFV campus Florestal, seguindo o protocolo de extração de DNA utilizando a sílica. A padronização do PCR para detecção do polimorfismo TGFBR1*9A/6A foi realizada com o uso do adjuvante BSA, TA. a 68oC e 35 ciclos. Ressalta-se a necessidade de amplificação de um maior número de amostras para confirmar a eficácia de tal padronização. Outra medida sugerida é melhorar a qualidade das amostras com a digestão enzimática com RNAse. Os marcadores polimórficos avaliados nos genes SMAD3, SMAD4 e SMAD7, pelo método in silico consistiu apenas aqueles presentes em regiões codificadoras por considerar que representam aproximadamente metade das lesões gênicas conhecidas responsáveis por doenças genéticas humanas. A investigação em banco de dados (OMIM; NCBI; Ensembl; Uniprot) resultaram em 10 polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) em SMAD3, 5 em SMAD4 e 1 em SMAD7. Após análise funcional in silico com algoritmos disponíveis on line (PROVEAN; PolyPhen-2), sugere-se a escolha dos polimorfismos. ALA112VAL (rs387906854) e PRO263LEU (rs387906855) em SMAD3, ASP493HIS (rs121912578) em SMAD4 e: IVS3, T/C (rs4939827) em SMAD7, para estudo populacional. Este trabalho gera uma perspectiva imediata de realizar uma investigação do polimorfismo TGFBR1*9A/6A na população de pacientes chagásicos no intuito de verificar uma possível susceptibilidade genética no desenvolvimento da cardiopatia chagásica crônica, no intuito de: compreender melhor a patogênese da doença; investigar marcadores moleculares que possam ser úteis para fins diagnósticos para estratificação dos pacientes, permitindo uma conduta clínica individualizada. |